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PanaceaGel 3D細(xì)胞培養(yǎng)常見問題
瀏覽次數(shù):5371 發(fā)布日期:2015-05-11

1 問:PanaceaGel是什么?

答:PanaceaGel是化學(xué)合成的肽水凝膠,PH為中性。該凝膠為透明、生物可降解、3D網(wǎng)絡(luò)支架,不包含任何生物來源的成分,小瓶盛裝。

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2 問:PanaceaGel是什么材質(zhì)的?

答:PanaceaGel100%是由13個天然氨基酸化學(xué)合成的肽。原子力顯微鏡(AFM)和電鏡(SEM,TEM)觀察也發(fā)現(xiàn),水溶液中小肽根據(jù)天然3D網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)自發(fā)組裝成納米纖維。由合成肽和碳酸鈉調(diào)節(jié)水凝膠PH值,約8.5%的海藻糖作為等滲試劑調(diào)節(jié)滲透壓。

3 問:PanaceaGel剛性如何?

答:隨著肽濃度和混合物中鹽濃度變化,PanaceaGel剛性不斷變化。培養(yǎng)細(xì)胞分泌的細(xì)胞外基質(zhì)也會影響其機(jī)械強(qiáng)度。例如流變學(xué)測量顯示,以2:1的比例混合PanaceaGel0.4%)和DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium),儲能模量(G’)和損耗模量(G’’)分別為97.0 ± 2.1 Pa 15.3 ± 1.4 Pa

4 問:PanaceaGel需要滅菌么?

答:發(fā)貨前PanaceaGel已經(jīng)經(jīng)過高壓滅菌。無需進(jìn)一步滅菌。

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5 問:如何儲存PanaceaGel?

答:PanaceaGel需在4-25℃避光保存。

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6 問:室溫條件下PanaceaGel穩(wěn)定性如何?

答:未開封的PanaceaGel4-25℃時保存在黑暗處能放置6個月。長期穩(wěn)定性研究正在進(jìn)行中。

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7 問:PanaceaGel應(yīng)用于細(xì)胞懸液時需進(jìn)行任何預(yù)處理么?

答:不需要。PanaceaGelPH為中性,所以用于細(xì)胞懸液時無需再平衡。二者極易混合,但液體混合時一定要迅速,因為PanaceaGel只要暴露于培養(yǎng)基中的鹽中流動性就會大大降低。

8 問:PanaceaGel能用于何種細(xì)胞?

答:已經(jīng)使用PanaceaGel成功培養(yǎng)了以下細(xì)胞:

小鼠骨骼肌細(xì)胞(C2C12)

大鼠骨骼肌細(xì)胞(L6)

小鼠成纖維細(xì)胞(NIH3T3)

人成纖維細(xì)胞(TIG-1)

人軟骨肉瘤細(xì)胞(OUMS-27)

新生的心肌細(xì)胞(直接分離得到)

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9 問:PanaceaGel和其他細(xì)胞三維培養(yǎng)材料有何異同?

答:參考下表

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PanaceaGel

膠原Collagen

生物可降解聚合物


Biodegradable polymer

來源

合成

動物源性

合成

剛性

中等

中等


PH

中性

中性、酸性

中性

生物親和性

良好

極佳

良好

透明度




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10 問:實驗中如何選擇PanaceaGel使用濃度?

答:有兩種濃度的PanaceaGel,分別為0.4%0.8%。初始實驗,推薦將0.4%PanaceaGel和細(xì)胞懸液以1:1的比例等體積混合,獲取PanaceaGel終濃度為0.2%。0.8%PanaceaGel能用于制作更高硬度的水凝膠。根據(jù)細(xì)胞類型不同,PanaceaGel和細(xì)胞的最佳密度也不同。

11 問:在PanaceaGel中如何培養(yǎng)細(xì)胞?

答:參考試驗步驟。

12 問:使用PanaceaGel時需要特殊裝置么?

答:不需要

13 問:最佳生長條件和限制是什么?

答:細(xì)胞終濃度為1051×106cells/mL,對大多數(shù)類型細(xì)胞都可以選擇普通培養(yǎng)基。PanaceaGel 3D培養(yǎng)細(xì)胞厚度不超過2mm

14 : PanaceaGel用過的細(xì)胞能再次培養(yǎng)么?

答:可以。破壞支架后通過移液能釋放細(xì)胞并再次培養(yǎng)。

15 問:如何將生物活性物質(zhì)整合到PanaceaGel中(小肽,生長因子等)?

答:生物活性物質(zhì)能添加到培養(yǎng)基或細(xì)胞懸液中。如果加入培養(yǎng)基中,生物活性物質(zhì)必須在30分鐘內(nèi)浸潤并抵達(dá)細(xì)胞。若添加到細(xì)胞懸液中,需保持生物活性物質(zhì)最適濃度。

16 問:能否在PanaceaGel表面培養(yǎng)細(xì)胞?

答:可以。添加細(xì)胞懸液前,PanaceaGel能包被培養(yǎng)皿、插件、孔板或其他細(xì)胞培養(yǎng)盤。加入細(xì)胞懸液時操作要輕柔,避免攪動。

17 問:PanaceaGel 3-D培養(yǎng)的細(xì)胞下游分析有哪些?

答:我們已成功進(jìn)行過以下實驗:

-DAPI PI或鈣黃綠素染細(xì)胞測免疫活性

-熒光試劑染色后進(jìn)行DNA 計數(shù)

-Western blot分析

-免疫染色

-SEM

-TEM

18 問:PanaceaGel3D 培養(yǎng)的細(xì)胞能移植到體內(nèi)進(jìn)行分析么?
答:滿載細(xì)胞的PanaceaGel能植入活體動物組織中,進(jìn)行專門活體研究。PanaceaGel本身是生物可降解的,體外研究中表明無毒性。

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